• Langue : Français
• Discipline : Sciences naturelles
• Identifiant : Inconnu
• Type de mémoire : Habilitation à diriger des recherches
• Date de soutenance : 01/01/2003

Résumé en langue originale

Le facteur Willebrand (VWF) est une glycoprotéine multimérique synthétisée par les cellules endothéliales et les mégacaryocytes. Il joue un rôle essentiel : - dans l'hémostase primaire, en participant à l'adhésion des plaquettes au sous-endothélium et à l'agrégation plaquettaire. Dans ce processus, les formes de VWF de haut poids moléculaires sont les plus efficaces sur le plan hémostatique ; - dans la coagulation, en se liant au facteur anti-hémophilique A (FVIII), lui servant de protéine porteuse et le protégeant d'une dégradation par la protéine C activée ou le facteur X activé. La maladie de Willebrand (VWD), maladie hémorragique héréditaire la plus fréquente, est caractérisée soit par un défaut quantitatif partiel (type 1) ou total (type 3) en VWF soit par un défaut qualitatif de ce facteur (type 2). L'introduction de ce mémoire présente les caractéristiques structurales et fonctionnelles du VWF indispensables à la compréhension de ses mécanismes d'action, le diagnostic, les origines et le traitement de la VWD. La 1ère partie est consacrée à l'étude d'anomalies moléculaires du gène du VWF responsables de défauts de liaison du VWF à la glycoprotéine Ib plaquettaire. La 2ème partie est ciblée sur l'étude d'anomalies moléculaires responsables de défauts de liaison du VWF au FVIII. Une double approche reposant sur l'étude de plasmas de patients atteints de différents sous-types qualitatifs de la VWD et de VWF recombinant muté a été utilisée pour analyser la relation phénotype / génotype du patient. Le diagnostic de la VWD se fait sur la base des données cliniques du patient ainsi que sur l'étude des caractéristiques fonctionnelles et structurales du VWF plasmatique. Après extraction de l'ADN génomique du patient à partir de sang, les exons d'intérêt du gène du VWF sont amplifiés par polymerase chain reaction (PCR) et séquencés. Lorsqu'une nouvelle anomalie moléculaire est identifiée, celle ci est introduite, par mutagenèse dirigée, dans l'ADNc du VWF contenu dans un vecteur d'expression approprié. Ce vecteur muté est alors transfecté, de façon transitoire, dans des cellules Eucaryotes (Cos-7). Les caractéristiques du VWF recombinant ainsi obtenu sont comparées à celles du VWF recombinant normal (taux d'expression, profil multimérique, liaison aux ligands) et à celles du VWF plasmatique. Les résultats de ces études sont présentés sous la forme de 5 publications.