Identification et expression d'anomalies moléculaires identifiées chez des patients atteints de la maladie de Willebrand Sang -- Plaquettes -- Agrégation Glycoprotéines Liaison génétique Amplification génique Réaction en chaîne de la polymérase Molécules recombinées von Willebrand, Maladie de Sang -- Coagulation -- Facteur VIII Sang -- Coagulation -- Facteur de von Willebrand -- Formes recombinées Mutagenèse dirigée Anomalies moléculaires 572.877 Le facteur Willebrand (VWF) est une glycoprotéine multimérique synthétisée par les cellules endothéliales et les mégacaryocytes. Il joue un rôle essentiel : - dans l'hémostase primaire, en participant à l'adhésion des plaquettes au sous-endothélium et à l'agrégation plaquettaire. Dans ce processus, les formes de VWF de haut poids moléculaires sont les plus efficaces sur le plan hémostatique ; - dans la coagulation, en se liant au facteur anti-hémophilique A (FVIII), lui servant de protéine porteuse et le protégeant d'une dégradation par la protéine C activée ou le facteur X activé. La maladie de Willebrand (VWD), maladie hémorragique héréditaire la plus fréquente, est caractérisée soit par un défaut quantitatif partiel (type 1) ou total (type 3) en VWF soit par un défaut qualitatif de ce facteur (type 2). L'introduction de ce mémoire présente les caractéristiques structurales et fonctionnelles du VWF indispensables à la compréhension de ses mécanismes d'action, le diagnostic, les origines et le traitement de la VWD. La 1ère partie est consacrée à l'étude d'anomalies moléculaires du gène du VWF responsables de défauts de liaison du VWF à la glycoprotéine Ib plaquettaire. La 2ème partie est ciblée sur l'étude d'anomalies moléculaires responsables de défauts de liaison du VWF au FVIII. Une double approche reposant sur l'étude de plasmas de patients atteints de différents sous-types qualitatifs de la VWD et de VWF recombinant muté a été utilisée pour analyser la relation phénotype / génotype du patient. Le diagnostic de la VWD se fait sur la base des données cliniques du patient ainsi que sur l'étude des caractéristiques fonctionnelles et structurales du VWF plasmatique. Après extraction de l'ADN génomique du patient à partir de sang, les exons d'intérêt du gène du VWF sont amplifiés par polymerase chain reaction (PCR) et séquencés. Lorsqu'une nouvelle anomalie moléculaire est identifiée, celle ci est introduite, par mutagenèse dirigée, dans l'ADNc du VWF contenu dans un vecteur d'expression approprié. Ce vecteur muté est alors transfecté, de façon transitoire, dans des cellules Eucaryotes (Cos-7). Les caractéristiques du VWF recombinant ainsi obtenu sont comparées à celles du VWF recombinant normal (taux d'expression, profil multimérique, liaison aux ligands) et à celles du VWF plasmatique. Les résultats de ces études sont présentés sous la forme de 5 publications. Electronic Thesis or Dissertation Text FR 2 : 1369 Ko, 10 Ko https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/HDR/2003/50376-2003-269-270.pdf https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/HDR/2003/50376-2003-269.pdf Hilbert Lysiane 2003-01-01 Sciences naturelles Université Lille1 - Sciences et Technologies thesis.degree.grantor_1 026404184 HDR non oui Mazurier Joël intervenant_1 ddc:570 Mazurier Joël Université Lille1 - Sciences et Technologies ASCII PDF 1402101 ASCII PDF 9999