• Langue : Français
• Discipline : Pharmacie. Biologie médicale
• Identifiant : 2016LIL2E130
• Type de thèse : Doctorat de pharmacie
• Date de soutenance : 29/04/2016

Résumé en langue originale

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est le sixième cancer en terme de fréquence et le second en terme de mortalité par cancer à l’échelle mondiale. Il représente à lui seul 90% des tumeurs primitives du foie et apparaît dans 90% des cas sur une pathologie hépatique préexistante : la cirrhose. Une très grande disparité géographique demeure en termes d’étiologies avec une forte incidence dans les pays pour lesquels le virus de l’hépatite B est endémique. Les seuls traitements curatifs sont la transplantation et la résection hépatique. Malheureusement, les techniques de diagnostic et de surveillance actuelles étant limitées, la majorité des patients ne sont diagnostiqués qu’à un stade avancé et ne peuvent être candidats à la chirurgie. Les options thérapeutiques sont donc le plus souvent palliatives. La mortalité est très forte, avec une médiane de survie ne dépassant pas les six mois. L’errance thérapeutique pourrait être compensée par un diagnostic plus précoce, c’est pourquoi le développement de nouvelles stratégies diagnostiques est un véritable enjeu de santé publique. L’ADN circulant plasmatique a récemment été mis en lumière pour de nombreuses applications. Le développement de cette « biopsie liquide » est en pleine expansion dans le but d’une utilisation dans les examens de biologie médicale comme biomarqueur précoce de la tumorigénèse. Cette classe émergente de test moléculaire, qui a déjà fait ses preuves pour diverses applications, pourrait permettre d’obtenir un diagnostic plus précoce, un pronostic plus précis, des informations théranostiques utiles dans le CHC et l’amélioration du confort du patient restreignant la répétitivité des biopsies hépatiques. Dans cette étude, quatre régions d’intérêt ont été ciblées et sujettes au séquençage de nouvelle génération (NGS) par la technique Mi-seq Illumina® à partir du plasma de 14 patients issus d’une cohorte de 155 patients porteurs d’un CHC hospitalisés dans le service de gastroentérologie du Nihon University Hospital. Les données obtenues portent sur deux loci porteurs de mutations : d’une part, le promoteur du gène codant pour la transcriptase inverse de la télomérase (TERT), muté dans 59% des CHC selon une étude de 2013, et d’autre part, le gène CTNNB1 codant pour la ß-caténine, qui est muté dans 26% des lignées cellulaires tumorales HepG2. De précédentes études révèlent en effet un rôle majeur de la voie Wnt/ß-caténine dans le développement du CHC. Plusieurs hotspots de méthylation se sont en outre avérés être de marqueurs candidats intéressants. Ce sont des gènes dont les îlots CpG, présents au niveau du promoteur, peuvent subir une méthylation au cours du processus de carcinogénèse. Pour la préparation de la librairie NGS, une PCR bisulfite a été nécessaire dans le but de différencier les cytosines méthylées des cytosines déméthylées. Les deux promoteurs de gène candidats ont été sélectionnés : CELF6 et RNF135, qui subiraient des modification épigénétiques au cours de la carcinogénèse hépatique. Ces premières investigations sur 14 patients devront à l’avenir être comparées à un plus grand pool de volontaires sains, et permettront d’élargir l’étude aux ADN circulants déjà extraits des 155 patients de la cohorte. Enfin, de nouvelles technologies de type NGS sont en cours d’optimisation pour améliorer la sensibilité et étendre l’étude à d’autres gènes candidats.

Résumé traduit

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