• Langue : Français
• Discipline : Médecine. Hématologie
• Identifiant : 2017LIL2M062
• Type de thèse : Doctorat de médecine
• Date de soutenance : 24/03/2017

Résumé en langue originale

Contexte. Le séquençage de l’ADN circulant (ADNc) permet de suivre l’évolution clonale en réalisant des prélèvements séquentiels par une simple prise de sang. Son utilisation dans le myélome multiple (MM) est toutefois dépendante d’études caractérisant le profil génomique de l’ADN circulant en comparaison à l’ADN des cellules tumorales de la moelle osseuse (ADNt). Méthodes. Dans cette étude, nous avons réalisé un séquençage génomique complet de très faible couverture (ULP-WGS) pour 88 échantillons d'ADNc. Les librairies ont été construites avec le kit Kappa Hyper Plus et séquencées sur un HiSeq 4000 avec une couverture de 0,1X ; permettant de quantifier la fraction tumorale et de déterminer les anomalies du nombre de copies (CNA). Un séquençage exonique complet (WES) a été réalisé sur 30 échantillons appariés ADNc/ADNt/ADN germinal correspondant à 10 patients. Les librairies ont été préparées avec le kit Nextera Rapid Capture Exome et séquencées sur HiSeq 4000 avec une couverture de 200X. Les données de séquençage ont été analysées à l’aide des logiciels MuTect, ABSOLUTE, ReCapSeg, GISTIC et MutSig. Résultats. Parmi les 88 échantillons séquencés par ULP-WGS (73 MM, 10 SMM et 5 MGUS), la fraction tumorale dans l'ADNc variait de 0 à 91% avec une moyenne de 12,4%. De plus, 75% des échantillons avaient plus de 3% d’ADN tumoral détectable au sein de l’ADNc. Par WES, les CNA étaient concordantes entre l’ADNc et l’ADNt. Parmi les gènes mutés de façon récurrente dans le MM – dont KRAS, NRAS et TP53 - 98% des mutations présentes dans l'ADNt étaient détectées dans l'ADNc. Concernant l'hétérogénéité clonale, parmi les mutations détectées dans l’ADNt, 98% des mutations clonales et 64% des mutations sous-clonales étaient retrouvées dans l’ADNc. L'analyse par clusters de mutations entre l'ADNc et l’ADNt a permis d’identifier une majorité de clones et sous-clones communs aux 2 compartiments. Cependant, certains sousclones n’étaient présents que dans un seul compartiment, indiquant que l’ADNc peut améliorer la définition de l’hétérogénéité clonale dans le MM. Conclusions. Ces résultats indiquent que le séquençage par WES et par ULP-WGS de l'ADNc et des CTC est représentatif du statut mutationnel des cellules tumorales de la moelle osseuse et peut améliorer la résolution de l'hétérogénéité clonale dans le MM. Cette approche pourrait donc permettre d'étudier l'évolution clonale et la maladie résiduelle de façon séquentielle dans le MM.

Résumé traduit

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