• Langue : Français
• Discipline : Pharmacie. Biologie médicale
• Identifiant : 2016LIL2E063
• Type de thèse : Doctorat de pharmacie
• Date de soutenance : 30/06/2016

Résumé en langue originale

Les techniques de biologie moléculaire sont aujourd’hui incontournables dans le bilan initial d’une leucémie aiguë. Leur sensibilité élevée et la possibilité de les standardiser en ont fait des outils de choix dans l’évaluation diagnostique et pronostique des malades atteints de LA. De plus, 30 à 40% des LA présentent une translocation équilibrée induisant la fusion de deux gènes avec production d’un ARN chimérique. Ce transcrit est alors considéré comme un marqueur moléculaire. Dans ce travail, nous avons analysé les performances d’une nouvelle technique de biologie moléculaire : la RT-MLPA. Cette technique permet la détection de l’ensemble des transcrits chimériques et de certaines mutations telles que NPM1. La RT-MLPA est réalisée grâce au design de 220 oligonucléotides localisés sur 68 gènes. Après préparation de l’ADNc, celui-ci est hybridé avec le mélange suivi d’une ligation et enfin d’une amplification par PCR et du séquençage par pyroséquenceur. Nous avons testé au total 858 patients à partir des protocoles ALFA0701, ELAM02 et de la routine du laboratoire d’Hématologie du CHRU de Lille sur une période donnée. Les résultats retrouvés en RT-MLPA étaient concordants avec les techniques classiques pour 815 patients. Cependant, 11 résultats n’étaient pas retrouvés par RT-MLPA. Il s’agissait de mutations rares de NPM1 et de réarrangements de MLL dont les exons n’étaient pas présents dans le mix oligonucléotidique. La RT-MLPA a permis de mettre en évidence 32 anomalies non retrouvées par technique classique concernant les LAM mais également les LAL, notamment par la détection de transcrits LAL phi-like. En conclusion, la RT-MLPA est une technique simple, rapide, avec un coût faible qui présente un réel intérêt dans la prise en charge des leucémies aiguës au diagnostic car elle permet de screener un maximum de transcrit dans un minimum de temps. Toutefois, du fait de la non exhaustivité, le screening par FISH de MLL, NUP98 et la recherche des mutations de NPM1 restent indispensables. Sa mise en place en routine au laboratoire d’Hématologie de Lille est imminente dans le but de remplacer les différentes techniques.

Résumé traduit

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