• Langue : Français
• Discipline : Pharmacie hospitalière
• Identifiant : 2015LIL2E048
• Type de thèse : Doctorat de pharmacie
• Date de soutenance : 29/05/2015

Résumé en langue originale

L’analyse moléculaire de l’anomalie responsable de l’hémophilie est essentielle à la prise en charge du patient ainsi qu’au dépistage des conductrices. La méthode de référence du séquençage des gènes F8 et F9 est la technique de Sanger mais celle-ci reste chronophage et coûteuse. L’objectif de ce travail a été de mettre au point le séquençage à haut débit de ces 2 gènes par Next-Generation Sequencing (NGS) au sein du laboratoire d’hémostase du CHRU de Lille. Nous avons comparé chez 104 patients de la région Nord-Pas de Calais (62 déjà génotypés et 42 jamais génotypés auparavant) les capacités de détection de mutations variées des gènes F8 et F9 avec deux stratégies analytiques différentes : kit de préparation de librairie AmpliSeq™ (Life Technologies™) couplé au séquenceur Ion PGM™ (Life Technologies™) et kit HaloPlex™ (Agilent Technologies™) couplé au séquenceur Ion Proton™ (Life Technologies™). L’anomalie causale a été retrouvée correctement par au moins une des deux stratégies chez 92% des patients déjà génotypés. Une mutation a été mise en évidence chez 90% des patients jamais génotypés. Dix de ces mutations sont inconnues des bases de données et sept d’entre elles sont probablement responsables du phénotype des patients. Globalement, les deux stratégies d’analyse présentent la même efficacité de détection des mutations mais la même difficulté à détecter les petites insertions/délétions au sein des homopolymères de l’exon 14 du F8. La technique AmpliSeq™ est cependant un peu moins coûteuse et plus simple d’utilisation que la technique HaloPlex™. Cette mise au point permettra de proposer un séquençage rapide et complet des gènes F8 et F9 par NGS aux hémophiles de la région Nord-Pas de Calais.L’analyse moléculaire de l’anomalie responsable de l’hémophilie est essentielle à la prise en charge du patient ainsi qu’au dépistage des conductrices. La méthode de référence du séquençage des gènes F8 et F9 est la technique de Sanger mais celle-ci reste chronophage et coûteuse. L’objectif de ce travail a été de mettre au point le séquençage à haut débit de ces 2 gènes par Next-Generation Sequencing (NGS) au sein du laboratoire d’hémostase du CHRU de Lille. Nous avons comparé chez 104 patients de la région Nord-Pas de Calais (62 déjà génotypés et 42 jamais génotypés auparavant) les capacités de détection de mutations variées des gènes F8 et F9 avec deux stratégies analytiques différentes : kit de préparation de librairie AmpliSeq™ (Life Technologies™) couplé au séquenceur Ion PGM™ (Life Technologies™) et kit HaloPlex™ (Agilent Technologies™) couplé au séquenceur Ion Proton™ (Life Technologies™). L’anomalie causale a été retrouvée correctement par au moins une des deux stratégies chez 92% des patients déjà génotypés. Une mutation a été mise en évidence chez 90% des patients jamais génotypés. Dix de ces mutations sont inconnues des bases de données et sept d’entre elles sont probablement responsables du phénotype des patients. Globalement, les deux stratégies d’analyse présentent la même efficacité de détection des mutations mais la même difficulté à détecter les petites insertions/délétions au sein des homopolymères de l’exon 14 du F8. La technique AmpliSeq™ est cependant un peu moins coûteuse et plus simple d’utilisation que la technique HaloPlex™. Cette mise au point permettra de proposer un séquençage rapide et complet des gènes F8 et F9 par NGS aux hémophiles de la région Nord-Pas de Calais.

Résumé traduit

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