• Langue : Français
• Discipline : Chimie organique et macromoléculaire
• Identifiant : 2007LIL10089
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/2007

Résumé en langue originale

-permet de séparer et de détecter en ligne les protéines entières. L'acquisition en mode SIM (Selected Ion Monitoring) offre une meilleure sensibilité et spécificité de détection en sélectionnant trois ions multichargés caractéristiques de la protéine. La méthode développée a ensuite été appliquée pour détecter le NGF (Nerve Growth Factor), protéine neurotrophique de 13,5 kDa, qui est un marqueur potentiel du cancer du sein. Une limite de détection de 0,1 ng/mL a été atteinte pour détecter le NGF recombinant humain. Cette méthode a permis de détecter et doser le NGF dans la lignée cellulaire cancéreuse mammaire MCF-7, ce résultat a été confirmé par une analyse à haute résolution (FTICR-MS). L'étude de sérums a mis en évidence l'importance d'éliminer avant l'analyse les protéines de forte abondance. La déplétion des protéines majoritaires par immunoaffinité a permis d'analyser les échantillons de sérums de souris ou de patientes atteintes d'u n cancer du sein, pour y détecter le NGF. Ces résultats montrent la possibilité d'utiliser le couplage nanoLC - spectrométrie de masse en protéine entière pour détecter un nouveau marqueur potentiel du cancer du sein. Cette méthode pourra être également appliquée à d'autres pathologies. La recherche de biomarqueur dans les fluides physiologiques est actuellement un axe de recherche en plein essor. L'identification de ces protéines est cruciale pour détecter plus précocement les maladies. Actuellement l'identification de protéine est effectuée à partir de la détection de leurs peptides obtenus après digestion enzymatique. Il est cependant difficile de détecter par cette méthode tant les modifications post-traductionnelles que les protéines de petite masse moléculaire présentes à faible concentration dans un mélange biologique complexe. Le développement de nouvelles méthodes sensibles permettant d'analyser ces protéines intactes est donc nécessaire. L'objectif de ce travail a donc été de développer une nouvelle méthode de détection de protéines entières basée sur un couplage nano-chromatographie liquide / spectrométrie de masse. L'utilisation d'une nanocolonne C4 montée sur la nanoLC couplée à un spectromètre de masse à trappe ionique