Université Lille1 - Sciences et Technologies Étude et modification du potentiel de N-glycosylation du maïs transgénique exprimant la lactoferrine humaine recombinante Analysis and modification of the N-glycosylation potential of transgenic maize expressing recombinant human lactoferrin 572.68 Glycoprotéines Protéines recombinées Plantes transgéniques Allergénicité Glycosyltransférases Glycosylation Lactoferrines Text Electronic Thesis or Dissertation fr Cette analyse nous a permis de montrer que le maïs, comme le tabac, représente un système d'expression capable de respecter le profil de N-glycosylation d'une glycoprotéine hétérologue et ceci de manière "site spécifique". Nous avons ensuite initié l'"humanisation" du potentiel de N-glycosylation du maïs en tentant d'exprimer in planta une galactosyltransférase (hb4GT I) et une sialyltransférase (hST6Gal I) humaines, impliquées dans la biosynthèse des antennes des N-glycannes. Après transformation stable du maïs via A. tumefaciens avec un vecteur d'expression inserrant les ADNc de ces deux enzymes, nous avons déterminé les activités enzymatiques à partir d'extraits protéiques totaux. AIors que l'activité galactosyltransférase mesurée in vitro s'est avérée très faible, la ST6Gal I produite dans la plante est très active in vitro et présente des paramètres cinétiques comparables à ceux de ST6Gal I produite dans les cellules d'insectes. Ces premiers résultats sont encourageants et démontrent la possibilité d'exprimer des glycosyltransférases humaines actives dans le maïs et ainsi d'améliorer son potentiel de glycosylation. L'utilisation en thérapie humaine des protéines recombinantes produites dans les plantes est actuellement limitée par leur glycosylation qui diffère de celle observée sur les glycoprotéines humaines d'origine. En effet, les structures N-glycanniques généralement observées chez les plamtes sont de type paucimannosidique [Xylb1-2]Man3GIcNAc[Fuca1-3jGlcNAc, les résidus b1,2-xylose et a1,3-fucose étant respoensables de l'alIergénicité des glycoprotéines végétales. Au cours de nos travaux, nous avons étudié le potentiel de N-glycosylation du maïs, plante monocotylédone utilisée comme système d'expression hétérologue par la société Meristem Therapeutics de Clermont-Ferrand. Dans un premier temps, nous avons déterminé la structure des N-glycannes portés par une glycoprotéine modèle exprimée dans le maïs, la lactoferrine humaine recombinante (mLf). Nos résultats ont montré que mLf est majoritairement substituée par des N-glycannes de type paucimannosidique [Xylb1-2]Man3GIcNAc[Fuca1-3]GlcNAc. Nous avons approfondi cette étude structurale en réalisant une analyse comparative de la N-glycosylation site-par-site de mLf avec celle de la lactoferrine humaine recombinante exprimée dans le tabac pIante dicotylédone. application/pdf 1 : 1 Mo https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2003/50376-2003-93.pdf Petit-Samyn Bénédicte 1900-01-01 075057794 2003LIL10062 2003-01-01 Sciences de la Vie et de la Santé Université Lille1 - Sciences et Technologies 026404184 Doctorat non oui Delannoy Philippe 060268069 ddc:570 ASCII PDF 9999 restriction 2012-01-01 9999-01-01 restriction 2012-01-01 9999-01-01