• Langue : Français
• Discipline : Sciences de la vie et de la santé
• Identifiant : 2001LIL10008
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/2001

Résumé en langue originale

Bordetella pertussis, la bactérie à gram négatif responsable de la coqueluche, synthétise et sécrète de nombreuses toxines et adhésines dont l'hémagglutinine filamenteuse (FHA). La FHA est l'adhésine majeure responsable de la fixation de la bactérie au tractus respiratoire de l'hôte ainsi que la protéine extracellulaire la plus abondante de B. Pertussis. Elle est synthétisée avec un peptide-signal clivé à son passage de la membrane cytoplasmique, suggérant qu'elle traverse la membrane cytoplasmique via la machinerie sec. Elle traverse ensuite la membrane externe via une seule protéine auxiliaire spécifique, FhaC. Ce mode de secrétion à 2 partenaires, la protéine sécrétée et sa protéine auxiliaire spécifique ( "Two-Partner-Secretion" ou TPS), est présent chez diverses bactéries pathogènes. Nous avons cherché à déterminer si la FHA traverse le périplasme en cours de sécrétion, et à étudier l'influence de sa conformation sur sa sécrétion via FhaC. Nous avons greffé par voie génétique à un troncat N-terminal de la FHA, un domaine protéique qui adopte un repliement globulaire maintenu par un pont disulfure intramoléculaire, CtxB. La formation de ce pont disulfure est catalysée par une disulfide oxydase périplasmique, DsbA. La sécrétion de cette protéine chimérique n'a été possible que lorsque la formation du pont disulfure de CtxB était empêchée. L'observation qu'un domaine globulaire entrave la sécrétion de la FHA via FhaC, suggère que la FHA pourrait transiter par le périplasme sans s'y replier, et traverser la membrane externe dans une conformation étendue. FhaC appartient à une famille de protéines de membrane externe (TpsB) toutes impliquées dans la sécrétion de facteurs de virulence et peu caracterisées. FhaC a été purifiée et incorporée dans des membranes artificielles ou elle formerait des canaux perméables aux sucres et aux ions. Nous avons également établi un modèle topologique de FhaC selon lequel FhaC formerait un tonneau dans la membrane externe, et l'avons testé par l'insertion aléatoire d'épitopes. Nos résultats ont confirmé que l'extrémité N-terminale est exposée à la surface cellulaire et que la moitié C-terminale forme un tonneau transmembranaire. Enfin, un changement de conformation a été mis en évidence dans la portion C-terminale de FhaC au cours de la sécrétion de la FHA.