• Langue : Français
• Discipline : Sciences de la vie et de la santé
• Identifiant : Inconnu
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/1999

Résumé en langue originale

Le parasite protozoaire Toxoplasma gondii assure son développement intracellulaire dans une vacuole dite parasitophore. La vacuole parasitophore (VP) est un compartiment spécialisé qui d'une part résiste à la fusion avec les endosomes de la cellule-hôte et d'autre part constitue une interface d'échanges métaboliques entre le parasite et la cellule parasitée. Les protéines GRA, contenues dans les granules denses du parasite, sont sécrétées sous forme soluble dans la VP où elles acquièrent une topologie membranaire. Constituants majeurs de la VP, les protéines GRA joueraient un rôle déterminant dans le développement intracellulaire du toxoplasme, cependant à ce jour la fonction de ces protéines n'est pas connue. Les protéines GRA5 et GRA6 ont été choisies comme modèles d'étude car bien que présentant des similitudes structurales (deux domaines hydrophobes encadrés de régions hydrophiles), elles présentent un tropisme membranaire différentiel au sein de la vacuole parasitophore. La protéine GRA5 traverse la bicouche lipidique de membrane délimitante de la vacuole parasitophore alors que la protéine GRA6, s'intègre dans les membranes du réseau intravacuolaire. Au cours de la première partie de ce travail, nous avons mis en évidence l'existence d'un polymorphisme de taille des protéines GRA5 et GRA6 chez différentes souches de toxoplasmes. Ce polymorphisme permet de répertorier les souches parasitaires dans les trois groupes génotypiques de Toxoplasma gondii. Dans un second temps, le développement de la manipulation génétique du toxoplasme, nous a permis d'aborder la fonction de la protéine GRA5 par l'invalidation de son gène. La mise en place d'un système de double sélection positive-négative a permis l'obtention d'un mutant nul GRA5 dans la souche RH. L'analyse du phénotype du mutant nul a mis en évidence que la protéine GRA5 est une protéine non essentielle pour les toxoplasmes de la souche RH. De plus, l'absence de son expression ne perturbe ni l'ultrastructure de la vacuole parasitophore, ni la virulence chez la souris, ni la multiplication intracellulaire du toxoplasme. Enfin, dans le cadre des études sur les mécanismes d'insertion membranaire post-sécrétoire des protéines GRA, la troisième partie de ce travail visait à appréhender l'étude du tropisme différentiel de GRA5 et GRA6 pour les membranes vacuolaires, par l'expression de protéines chimériques (GRA5-GRA6). Des lignées stables de toxoplasmes exprimant les protéines hybrides (échange des domaines N- et C- terminaux) fusionnées à leur extrémité C-terminale avec l'épitope du virus de l'influenza ont été obtenues. Les protéines chimériques N5T5C6-HA9, N6T5C5-HA9 et N6T5C6-HA9 se comportent comme des protéines membranaires dans la VP. L'analyse de leur trafic intravacuolaire, 10 minutes après l'invasion cellulaire, a révélé que seule, la protéine N6T5C6-HA9 se comporte comme GRA6 en transitant par la partie postérieure du parasite. Les protéines N5T5C6-HA9, N6T5C5-HA9 semblent se comporter comme la protéine RGA5. Ces résultats suggèrent l'intervention des domaines N-et C-terminaux de GRA6 lors de son accumulation postérieure dans la VP.