• Langue : Français
• Discipline : Sciences de la vie et de la santé
• Identifiant : Inconnu
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/1999

Résumé en langue originale

Les mécanismes contrôlant la virulence mycobactérienne sont encore peu connus. Pour étudier ces mécanismes, les systèmes de transduction sensorielle à deux composants constituent une cible privilégiée. Nos recherches ont permis de cloner des gènes codant des éléments de systèmes à deux composants chez Mycobacterium tuberculosis et Mycobacterium bovis BCG appelés senX3 et regX3. Ce système appartient à la famille des couples PhoB/PhoR et PhoP/PhoQ, impliqués dans la virulence chez diverses bactéries pathogènes. Nous avons produit ces deux protéines sous une forme recombinante chez Escherichia coli et les avons purifiées. Grâce à l'obtention d'anticorps dirigés contre ces protéines et à l'aide de fusions génétiques avec le gène rapporteur lac Z, nous avons montré que senX3 et regX3 sont exprimés chez le BCG et M. Tuberculosis. Nous avons caractérisé le mécanisme de phosphorylation du capteur senX3 et du régulateur regX3. Cette caractérisation a montré que ce système partage le mécanisme de base commun à tous les systèmes à deux composants. Nous avons pu montrer que le régulateur regX3 se lie à la séquence promotrice de son propre opéron, ce qui suggère que ce système est autorégulé, à l'instar de nombre d'autres systèmes à deux composants. De plus, nous n'avons pas observé d'effet majeur de la phosphorylation sur la liaison à l'ADN et la structure quaternaire de regX3. Ces observations suggèrent que la phosphorylation de regX3 pourrait exercer un effet d'activation en favorisant des interactions protéine-protéine avec l'ARN polymérase. En outre, une analyse plus détaillée du mécanisme de phosphorylation du capteur senX3 a été effectuée pour déterminer si comme les autres capteurs étudiés jusqu'à présent, les domaines cytoplasmiques de ces protéines se dimérisent et sont phosphorylés en trans. Cette étude a été effectuée en vue d'explorer la possibilité de produire ultérieurement une version mutante a effet dominant négatif in vivo. Par ailleurs, notre système de phosphorylation in vitro de senX3/regX3 pourrait permettre la recherche de molécules inhibitrices de systèmes à deux composants mycobactériens, qui pourraient correspondre à de nouvelles classes d'antibiotiques.