• Langue : Français
• Discipline : Biochimie
• Identifiant : Inconnu
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/1998

Résumé en langue originale

L'erythropoietine est une hormone glycoproteique d'origine essentiellement renale impliquee dans la differenciation des cellules souches erythroides en globules rouges. Elle est constituee d'un squelette proteique de 166 acides amines sur lequel on trouve 3 sites de n-glycosylation (asn-24, 38 et 83) et un site de o-glycosylation (ser-126). Voici quelques annees, l'une des activites du lfb de lille a ete de produire une erythropoietine humaine recombinante a partir de cellules humaines issues d'une lignee lymphoblastoide. Afin de cerner plus rapidement les conditions optimales de production de cette hormone, 3 conditions de culture differentes ont ete testees. Notre travail a consiste a etablir et comparer les profils de glycosylation obtenus pour chacune d'elles. L'analyse de la composition en monosaccharides des 3 erythropoietines a montre un taux eleve de fucose, de galactose, de n-acetylglucosamine et d'acide sialique. Les donnees quantitatives de cette analyse a permis de determiner un taux de glycosylation (poids/poids) proche de 30%. Dans les 3 cas, l'etude exhaustive de la sialylation a revele que i) les chaines glycanniques etaient fortement sialylees (>80%), ii) les 2 types de liaison sialyle (-2,3 et -2,6) etaient presents et iii) plus de 99% des acides sialiques etaient de l'acide n-acetylneuraminique. Pour l'etude de la structure des chaines glycanniques, les glycopeptides correspondant aux 4 sites de glycosylation de chacune des erythropoietines humaines recombinantes ont ete prepares par digestion enzymatique a l'endoproteinase glu-c, separes par hplc en phase inversee, sequences et analyses par spectrometrie de masse es-ms.