• Langue : Français
• Discipline : Sciences naturelles
• Identifiant : Inconnu
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/1994

Résumé en langue originale

rn messagers qui sont le reflet de l'activite des cellules et notamment a l'etude de la transcription des cytokines par les cellules du systeme immunitaire dans des conditions pathologiques (comme la schistosomiase) ou suite a l'injection d'un antigene (comme dans le contexte d'une strategie vaccinale). Toutefois, si la detection d'un faible nombre de copies etait facile, la quantification ou la comparaison se revelait plus delicate car l'efficacite d'amplification n'etait pas egale entre les differents echantillons. La solution etait d'utiliser une molecule d'adn controle qui permettait de suivre l'amplitude de ces variations. Nous avons choisi de construire une molecule d'adn standard polyspecifique synthetique qui nous permettait d'analyser les transcrits de 6 interleukines (il-2,4,5,6,10, et ifn-) et de la b-actine. Nous avons ensuite valide l'utilisation de cette molecule standard dans nos conditions experimentales et nous l'avons utilisee dans une etude preliminaire sur les repon ses du systeme immunitaire a l'injection d'un antigene. Nous avons egalement applique cette technique de rt-pcr a l'analyse des differentes chaines vb du recepteur t. Le couplage de la technique de pcr a l'analyseur automatique d'adn nous permet maintenant d'apprecier les differents rearrengements de la region cdr3 du recepteur t et donc une analyse plus fine des modifications du recepteur t. Cette technologie a ete appliquee a l'analyse des modifications induites par l'activation avec un superantigene sur le repertoire des cellules t. Enfin, l'utilisation de plus en plus frequente dans les laboratoires de recherche de cytokines recombinantes, nous a incite a rechercher une technique d'expression de proteines en grande quantite. Nous avons donc developpe l'expression de proteines par le systeme du baculovirus, et nous l'avons applique a la production d'il4 murine recombinante. Dans le domaine de l'immunologie et notamment dans l'etude des interactions qui regissent les echanges d'informations entre les cellules du systeme immunitaire, on a assiste ces dernieres annees a l'emergence de nouvelles approches technologiques. Ces nouvelles techniques, beaucoup plus performantes, permettaient pour la premiere fois d'analyser le role de chacun des acteurs du systeme immunitaire in vivo et non plus dans des systemes artificiels de restimulation ou de cultures in vitro. Il etait donc necessaire pour tous les laboratoires impliques dans ces etudes de developper ces nouveaux outils. En fait, c'est a partir de la decouverte de la technique de polymerisation en chaine ou pcr que l'on a pu assister a cet essor de nouvelles approches plus sensibles. Cette technique de pcr consiste en l'amplification exponentielle et specifique d'une sequence d'adn, ce qui permet ensuite de detecter facilement le produit amplifie. Cette technique a rapidement ete appliquee a l'etude des a