• Langue : Français
• Discipline : Sciences de la vie et de la santé
• Identifiant : Inconnu
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/1993

Résumé en langue originale

Nous avons tenté, au cours de notre étude, de caractériser chez Nereis diversicolor (annélide, polychète) des neuropeptides apparentés, d'une part, au sodium influx stimulating peptide (sisp) mis en évidence chez la limnée, et d'autre part, à la dynorphine 1-17 et a l'-néo-endorphine, molécules membres de la famille des opioïdes, décrits chez les mammifères. Les arnm extraits du cerveau des animaux ont été traduits in vitro (lysat de reticulocytes de lapin) ou in vivo (ovocytes de xenopus laevis). Pour chaque type de molécule (sisp et ipioïdes), nous avons observé une adéquation satisfaisante concernant la reconnaissance, par les anticorps spécifiques utilisés, entre les polypeptides traduits dans les systèmes acellulaire et cellulaire et les protéines extraites du cerveau des animaux. L'ensemble des données obtenues est en faveur de l'existence chez N. diversicolor, de grands précurseurs (60 a 80 kda) à partir desquels des produits actifs pourraient dériver. Afin de compléter nos résultats, nous avons entrepris une approche moléculaire en élaborant une banque d'expression à partir des arnm poly-a#+ de cerveaux de Nereis dans le vecteur zapii. La recherche de clones spécifiant une molécule apparentée au sisp a été effectuée à l'aide d'un criblage immunologique et à l'aide d'un criblage avec un adnc codant le sisp chez la limnée. Les molécules sélectionnées par ces criblages ont été sous-clonées dans le plasmide puc18, puis séquencées en phage m13mp18. Bien que toutes les données immunologiques nous indiquaient que des molécules de Nereis pouvaient être apparentées au sisp de limnée, les séquences de inserts sélectionnés par les réactifs utilisés ne nous ont pas permis de confirmer ces données. Des expériences de rt-pcr sur arnm de cerveaux de Nereis ont été réalisées pour tenter d'amplifier des fragments d'adn montrant des homologies. Des sondes oligonucléotidiques ont été synthétisées à partir des séquences les moins dégénérées et les plus conservées du sisp de la limnée d'une part, et de la prodynorphine de trois mammifères (homme, porc, rat) d'autre part. Pour les deux types de molécules envisagées, des fragments d'adn ont été amplifiés, sous-clones dans le plasmide pcrii, puis séquences. Les séquences obtenues sont discutées après les avoir confrontées aux données des banques