• Langue : Français
• Discipline : Sciences de la vie et de la santé
• Identifiant : Inconnu
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/1993

Résumé en langue originale

Au cours de ce travail, nous avons entrepris la caractérisation moléculaire de la protéine p21 ou gra5 de toxoplasma gondii. L'antigène p21 est commun aux stades tachyzoite (stade invasif durant lequel le parasite se divise dans une vacuole parasitophore) et bradyzoite (caractérisé par l'enkystement des parasites). C'est une molécule des granules denses du toxoplasme qui est détectée, après l'invasion de la cellule-hôte, à la membrane de la vacuole parasitophore ou à la paroi des kystes. Afin de cloner le gène gra5, une banque d'expression d'adnc de tachyzoites a été criblée à l'aide d'un sérum de rat dirigé contre une fraction hplc enrichie en antigène p21. Ce criblage a conduit à isoler des inserts codant pour différentes protéines, en particulier gra5 et une protéine de 32kda. Ces deux molécules ont été exprimées sous forme recombinante fusionnée. L'analyse des sérums anti-protéines recombinantes a permis de montrer l'existence d'une réactivité antigénique croisée entre ces deux molécules. Le séquençage complet du gène gra5 et de son environnement génomique a été réalisé à partir des inserts génomique et d'adnc isolés par hybridation. Le gène gra5, de 834pb, ne contient pas d'introns et code pour une protéine de 133 acides aminés. 5 séquences peptidiques obtenues par le microséquencage de l'antigène gra5 natif confirment la séquence déduite du cadre de lecture. Deux régions hydrophobes, l'une n-terminale et l'autre centrale, possèdent les caractéristiques d'un peptide signal et d'une région transmembranaire respectivement. Ces structures sont à mettre en relation avec le trafic de la protéine gra5, qui est secrétée par les granules denses et associée à la membrane de la vacuole parasitophore. Le gène codant pour la protéine de 32kda, de 1600pb, code pour un polypeptide de 230 acides aminés. Tout comme la protéine gra5, cette séquence contient deux régions hydrophobes. De plus, la représentation des deux séquences sous forme théorique d'hélice a révèlé des regroupements d'acides aminés communs à gra5 dans les domaines hydrophiles de la molécule. Cette analyse a permis d'identifier deux fragments peptidiques spécifiques de la protéine p32 et contre lesquels des immunsérums ont été produits. Ces deux sérums détectent la molécule p32 sous forme de granulations à l'intérieur des deux stades parasitaires. Ces homologies avec gra5, tant sur le plan de la structure moléculaire que de la distribution dans les parasites, sont en faveur d'une localisation de la molécule de 32kda dans les granules denses du toxoplasme