Université Lille1 - Sciences et Technologies Clonage et expression de l'ADNc d'une métalloprotéine (MPII) de l'annélide marine (Nereis diversicolor) Cloning and expression of the CDNa for metalloprotein (MPII) from the marine annelid nereis diversicolor 572.8 Polychètes Métalloprotéines ADN complémentaire Clonage moléculaire Text Electronic Thesis or Dissertation fr Chez l'Annélide polychète Nereis diversicolor, une métalloprotéine (MPII) ayant la propriété de fixer des métaux lourds tels que le cadmium a été précédemment caracterisée et purifiée dans notre laboratoire. Nous avons abordé l'étude de cette protéine en adoptant une nouvelle stratégie. Nous avons extrait et purifie les ARNm de coelomocytes (cellules libres dans le coelome des animaux). Ces ARNm ont été traduits in vitro (lysat de réticulocytes de lapin) ou in vivo (injection des ARNm dans les ovocytes de xenopus laevis. Les techniques du Western-blot et celles du test ELISA, mettant en oeuvre des anticorps monoclonaux anti MPII, indiquent que les coelomocytes sont un site de synthèse des ARNm de la MPII. Les traductions obtenues a partir de ces ARNm et la disponibilité d'anticorps poly- ou monoclonaux nous ont incité à élaborer une banque d'expression par un clonage de cDNa dans le vecteur lambda gt11. La sélection des clones de phages recombinés a été pratiquée par la révélation d'une immunoréaction des anticorps poly- ou monoclonaux confrontés aux protéines exprimées au niveau des plages de lyse. Les modalités de l'expression en abondance des protéines de fusion par des bactéries hôtes de phages recombinés et les conditions de détection de ces protéines par des anticorps anti-MPII nous ont conduit à invoquer une dégradation systématique de ces dernières par les bactéries. Les protéines de fusion, dans leur intégrité, seraient considérées comme toxiques par les cellules hôtes des phages recombinés application/pdf 1 : 1 Mo https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1990/50376-1990-73.pdf Benouareth Djamel Eddine 1900-01-01 134428277 1990LIL10061 1990-01-01 Sciences de la vie et de la santé Université Lille1 - Sciences et Technologies 026404184 Doctorat non oui Curgy Jean-Jacques 026807408 ddc:570 ASCII PDF 9999