Titre original :

Biosynthèse des glucanes périplasmiques osmorégulés chez Escherichia coli : analyse fonctionnelle des protéines MdoG et MdoH et caractérisation de deux nouvelles activités

Mots-clés en français :
  • Bactéries à Gram négatif
  • Escherichia coli
  • Glucanes -- Biosynthèse
  • Enveloppe bactérienne
  • Glucanes périplasmiques osmorégulés
  • Glycosyltransférase
  • Phosphoglycérol transférase

  • Langue : Français
  • Discipline : Sciences de la vie et de la santé
  • Identifiant : Inconnu
  • Type de thèse : Doctorat
  • Date de soutenance : 01/01/2002

Résumé en langue originale

Les glucanes périplasmiques osmorégulés (OPG) sont présents chez toutes les protéobactéries testées, où ils peuvent représenter jusqu'à 5% du poids sec de la bactérie. Leur biosynthèse est d'autant plus importante que l'osmolarité du milieu est faible. Les OPG d'E. coli sont formés d'une chaîne linéaire de résidus de glucose liés en bêta-1,2 et ramifiés par des résidus de glucose liés en bêta-1,6. Ces OPG peuvent être substitués par des résidus de phosphoglycérol, de succinate et de phosphoéthanolamine. Un opéron de deux gènes (mdoGH) soumis à une régulation osmotique est nécessaire à la biosynthèse du squelette glucosidique. Trois types de mutagenèse (dirigée, ou par greffage d'épitope aléatoire ou localisée) ont été effectués sur cet opéron dans le but d'établir une topologie fonctionnelle de ces deux protéines. Ces mutagenèses ont révélé la présence dans MdoH de deux domaines cytoplasmiques actifs, l'importance d'une boucle périplasmique et la stricte nécessité de 3 résidus d'acide aspartique, conservés dans les glycosyltransférase de la famille 2. Cette approche a aussi révélé l'importance des 80 derniers acides aminés de la protéine MdoG dans sa fonction. Un gène mdoD, paralogue du gène mdoG, est impliqué dans la biosynthèse du squelette glucosidique mais n'est pas indispensable. L'expression du gène mdoD, étudiée grâce à des fusions traductionnelles, est maintenue à un niveau de base en phase exponentielle et augmentée lors de l'entrée en phase stationnaire et de l'adaptation à une haute osmolarité. L'expression du gène mdoD dépend des facteurs de transcription sigma70 et sigmaS et d'un régulateur inconnu. Le produit du gène mdoB responsable de l'activité phosphoglycérol-transférase I membranaire est aussi responsable de l'activité phosphoglycérol-transférase II périplasmique. Nos études indiquent que le transfert du succinate s'effectue simultanément à la biosynthèse du squelette glucosidique et de manière plus tardive et séquentielle pour les résidus de phosphoglycérol.

  • Directeur(s) de thèse : Bohin, Jean-Pierre

AUTEUR

  • Lequette, Yannick
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