• Langue : Français
• Discipline : Sciences de la vie et de la santé
• Identifiant : 2006LIL10089
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 01/01/2006

Résumé en langue originale

Nous avons contribué à la mise en place d'une série de tests de cytométrie en flux destinés à évaluer la viabilité des hématies et destinés à se substituer aux procédés classiques de dosage de l'ATP et du 2,3-DPG. Nous nous sommes intéressée en particulier à une méthode à la calcéine-AM (un ester acétoxyméthylé de la fluorescéine) de détermination des activité estérasiques liées à la sénescence de cellules et sommes parvenue à la conclusion qu'elle représentait un test de choix en raison de sa simplicité, de sa sensibilité et de sa fiabilité. Dans le domaine de la recherche fondamentale, nous avons démontré que le test cytochimique de Dimri et al. (1995) de détection de l'activité p-galactosidasique à l'aide du substrat 5-bromo-4-chloro- 3-indolyl-j3-D-galactoside est certes valable pour l'étude de l'enzyme cytosolique des cellules nucléées, mais qu'il ne l'est pas pour celle de l'enzyme membranaire érythrocytaire car il annonce, d'une manière artefactuelle, une augmentation de son activité. En effet, la mesure de cette dernière par la méthode biochimique fondée sur l'emploi de l'umbelliféryl--D-galactoside qui exclut tout artefact, démontre, au contraire, une diminution de l'activité de l'enzyme chez les hématies physiologiquement ou artificiellement vieillies. En conséquence, à l'inverse des résultats obtenus avec les cellules nucléées, la diminution de l'activité 3-galactosidasique devient un marqueur de sénescence des hématies. Dans le domaine de la transfusion nous avons démontré que la clairance rapide des hématies transfusées (70% au terme de 3 jours) était liée à la transformation des discocytes en sphérocytes, seuls phagocytables et détectées par la microscopie électronique de balayage, transformation provoquée par la glycation des protéines érythrocytaires induite par le glucose ajouté aux milieux de conservation des hématies (9g par litre, Soit 10 fois la glycémIe) En outre, nous avons démontré que l'utilisation de l'automate MacoPharma ABC® imaginé et breveté par la Société MacoPharma de Tourcoing pour effectuer le prélèvement des sangs à hématocrite constant est un réel progrès car il protège les hématies du stress provoqué par le pH acide (5,5) des milieux de prélèvement.