• Langue : Français
• Discipline : Pharmacie
• Identifiant : 2019LILUE160
• Type de thèse : Doctorat de pharmacie
• Date de soutenance : 24/06/2019

Résumé en langue originale

Les mutations du gène NPM1 constituent un facteur pronostique majeur des LAM à caryotype normal. En pratique clinique la quantification des transcrits NPM1-mutés est réalisée par RT-qPCR pour les formes A, B et D mais n’est pas réalisée pour les variants rares. L’objectif de cette étude est d’évaluer l’aptitude de la PCR digitale à quantifier les mutations rares de NPM1 afin de valider cette technique pour une utilisation prospective. La PCR digitale permet une quantification absolue de séquences d’acides nucléiques cibles par fractionnement du milieu réactionnel puis discrimination et dénombrement des fractions positives ou négatives. Les performances de la méthode sont évaluées sur la forme classique A. Nous avons analysé 16 types de variants rares de NPM1. Les résultats sont encourageants. Le bruit de fond est négligeable, la technique est linéaire sur une gamme dynamique allant de 105 à 3,2 copies de NPM1 et la limite de détection est au moins égale à 0.01%. La comparaison de méthodes a montré des résultats tout à fait concordants avec la méthode de référence. La PCR digitale est très souple d’utilisation et offre plusieurs avantages par rapport à la qPCR. Ici, la quantification de NPM1-muté par rapport au gène contrôle ABL est réalisée en multiplex sur ADNc. Cette quantification simultanée du transcrit muté et du gène ABL autorise un débit élevé et permet de s’affranchir des aléas de pipetage. La quantification directe sans extrapolation à partir d’une courbe de calibration offre également une meilleure précision. D’un point de vue clinique, la PCR digitale permet de suivre la maladie résiduelle chez des patients mutés NPM1 là où WT1 peut faire défaut. La PCR digitale se présente comme une alternative à la qPCR pour le suivi des patients NPM1-mutés. Adaptée à la quantification des variants rares de NPM1, cette technique permettra de suivre l’évolution de la maladie résiduelle et de détecter précocement une rechute chez ces patients

Résumé traduit

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