Note ABES Développement de stratégies protéomiques pour la découverte de nouvelles protéines codées dans des séquences codantes non canoniques chez les eucaryotes Development of proteomics strategies for the discovery of novel proteins encoded within non-canonical open reading frames in eukaryotic species Protéines alternatives Quantification absolue 572.6 Synthèse protéique Protéomique Spectrométrie de masse ARN messagers ARN non codants Traduction génétique La vision traditionnelle de la synthèse protéique chez les eucaryotes comprend un ARN messager (ARNm) qui porte un seul cadre de lecture ouvert (ORF). Chaque gène codant eucaryote produit généralement une protéine canonique et éventuellement une ou plusieurs isoformes. Cependant, de nombreuses évidences expérimentales récentes démontrent que le protéome des eucaryotes a été sous-estimé, et que les cellules sont capables de synthétiser des protéines qui n’étaient jusqu’alors pas prédites. Ces nouvelles protéines « alternatives » (altProts) peuvent être issues de la traduction d’ORFs non annotés contenus sur des ARNms, ou des ARNs non codants. Ces découvertes ont été possibles grâce aux progrès techniques réalisés en biochimie analytique en protéomique par spectrométrie de masse. Dans le cadre de ces analyses, deux approches sont privilégiées. La première, ou bottom-up se base sur les produits peptidiques issus d’une digestion enzymatique des protéines quand la seconde ou top-down est basée sur la mesure des protéines entières. Les travaux réalisés dans cette thèse s’articulent autour du développement de stratégies pour la découverte et la caractérisation des altProts par approches protéomiques bottom-up et top-down. Ces aspects sont décrits dans plusieurs publications scientifiques qui seront présentées dans ce manuscrit. Elles comprennent une revue de bibliographie, deux publications relatives à l’application de l’approche top-down par micro-extractions de tissus de cerveau de rat et de biopsie tumorale ovarienne et une publication relative à la détermination de la stœchiométrie de deux protéines, l’une alternative et l’autre canonique toutes deux issues du même gène. The traditional view of protein synthesis in eukaryotic species involves one messenger RNA (mRNA) bearing a single open reading frame (ORF). Thus, each eukaryotic coding gene may produce one canonical protein and possibly one or more of its isoforms. However, numerous experimental evidence report that eukaryotic proteomes may have been under-estimated and that cells are capable of synthetizing proteins which had not been predicted thus far. These novel proteins, termed “alternative proteins” (altProts) may be translated from non-canonical ORFs localized in mRNAs or from RNAs annotated as non-coding. These discoveries were made possible thanks to technical progresses in analytical chemistry in mass spectrometry-based proteomics. These analyses are based on two main strategies; the “bottom-up” approach is based on the peptidic products of enzymatic digestion of native proteins whereas the second and more recent approach, termed “top-down”, is based on the analysis of intact protein by mass spectrometry. The work described in this thesis is focused on the development of experimental strategies helping the discovery and characterization of altProts using bottom-up and top-down approaches. The findings are described in scientific publications which are included in the thesis. These publications include a review, two publications on the application of the top-down approach using micro-extractions on rat brain tissue and ovarian tumor biopsy and one publication related to the stoichiometry elucidation of a canonical and an alternative protein both encoded within the same gene. Electronic Thesis or Dissertation Text fr en PDF 86679530 application/pdf https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/EDBSL/2017/50376-2017-Delcourt.pdf https://theses.fr/2017LIL10166/abes Delcourt Vivian Delcourt 1987-03-10 FR 22564150X https://theses.fr/2017LIL10166 2017LIL10166 https://doi.org/10.70675/0b9641f6z4aa8z4e54z9dd8z1525835c5baa 2017-12-14 Biologie-Santé Lille 1 026404184 Université de Sherbrooke (Québec, Canada) MADS_ETABLISSEMENT_DE_COTUTELLE_1 026431475 Doctorat Docteur es non oui Fournier Isabelle MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 137267029 Roucou Xavier MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_2 225640554 Franck Julien MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_3 142928232 École graduée Biologie-Santé (Lille ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 147705126 Protéomique, Réponse Inflammatoire, Spectrométrie de Masse (PRISM) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 161573533 ddc:570 Université de Sherbrooke (Québec, Canada) Fournier Isabelle Roucou Xavier Franck Julien École doctorale Biologie-Santé (Lille) Protéomique, Réponse Inflammatoire, Spectrométrie de Masse PDF 86679530