• Langue : Français
• Discipline : Biochimie et biologie moléculaire
• Identifiant : 2011LIL2S005
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 04/05/2011

Résumé en langue originale

D’étiologie inconnue, les maladies inflammatoires chroniques de l’intestin, telles que la maladie de Crohn ou la rectocolite hémorragique, semblent résulter d’une réaction immunitaire inappropriée vis-à-vis de la flore commensale chez des individus génétiquement prédisposés. De ce fait, la modulation du microbiote par des probiotiques, majoritairement des bactéries lactiques commensales (lactobacilles et bifidobactéries), représente une alternative thérapeutique intéressante et a déjà conduit à un certain nombre d’essais cliniques concluants. Cependant, les effets thérapeutiques des bactéries probiotiques se sont avérés spécifiques de la souche utilisée et les mécanismes d’action de ces micro-organismes restent encore méconnus. Dans cette étude, nous nous sommes intéressés au rôle du peptidoglycane et de la voie de signalisation NOD2 dans les capacités anti-inflammatoires de certains lactobacilles probiotiques. Dans un modèle murin de colite expérimentale mimant la pathologie humaine, nous avons tout d’abord montré que les capacités protectrices de la souche anti-inflammatoire Lactobacillus salivarius Ls33 nécessitent la présence du récepteur NOD2. Ce récepteur reconnaissant les produits de dégradation du peptidoglycane, nous avons préparé du peptidoglycane hautement purifié de la souche Ls33 et montré que l’administration de ce composant, par voie intrapéritonéale ou orale, protège les souris de la colite expérimentale. Nous avons également mis en évidence que l’effet protecteur du peptidoglycane de Ls33 implique la production d’IL-10, la voie immunosuppressive de l’indoleamine 2,3-dioxygénase et le développement, au sein des ganglions mésentériques, de cellules dendritiques régulatrices CD103+ et de cellules T régulatrices CD4+FoxP3+. Nous avons montré que le peptidoglycane de Ls33 favorise, in vitro, la différentiation de cellules dendritiques naïves en cellules dendritiques productrices d’IL-10, capables de protéger, après transfert adoptif, les souris de la colite de façon NOD2-dépendante. Les capacités protectrices n’ayant pas été obtenues avec le peptidoglycane de la souche non anti-inflammatoire L. acidophilus NCFM, nous avons ensuite réalisé une analyse structurale des deux peptidoglycanes. Alors que les deux souches arborent le muropeptide M-tri-Lys-D-Asn, nous avons identifié un muropeptide additionnel libéré uniquement par Ls33, le M-tri-Lys. Bien que les deux muropeptides synthétiques activent NOD2 in vitro, seule l’administration systémique du M-tri-Lys protège les souris de la colite. Cette protection est dépendante du récepteur NOD2 mais ne nécessite pas la présence de l’adaptateur principal des récepteurs de type Toll ou TLR, MyD88. En conclusion, nos résultats indiquent que le peptidoglycane et certains de ses dérivés sont des composants actifs dans la fonctionnalité des lactobacilles probiotiques et représentent une nouvelle stratégie thérapeutique pour le traitement des maladies inflammatoires chroniques de l’intestin.

Résumé traduit

N genetically susceptible individuals, an inappropriate mucosal immune responseagainst the intestinal microbiota appears to be the principal mechanism leading to thepathogenesis of (including Crohn’s disease and ulcerativecolitis). Therefore, modulation of the luminal contents with probiotics, mainly represented bycommensal lactic acid bacteria (lactobacilli and bifidobacteria), represents an attractivetherapeutic alternative and has already led to successful clinical trials. However, theprotective effect of probiotic bacteria clearly depends on the strains used and the precisemechanisms of action of these microorganisms are still unknown.In this study, we investigated the role of peptidoglycan and NOD2 signalling in the antiinflammatorycapacity of selected probiotic lactobacilli.In a mouse model of experimental colitis mimicking human pathology, we first showedthat the protective capacity of the anti-inflammatory strain Lactobacillus salivarius Ls33require NOD2 signalling. Since this receptor senses peptidoglycan degradation products, weprepared highly purified peptidoglycan from Ls33 and showed that systemic as well as oraladministration of this component was able to rescue mice from experimental colitis. We alsodemonstrated that the protective effect of Ls33 peptidoglycan involved the production of IL-10, the immunosuppressive indoleamine 2,3-dioxygenase pathway and the expansion ofregulatory CD103+ dendritic cells and CD4+FoxP3+ regulatory T cells within mesentericlymph nodes. Furthermore, we showed that the IL-10-producing dendritic cells induced byLs33 peptidoglycan in vitro were able to protect mice from colitis in a NOD2-dependentmanner after adoptive transfer.Since the observed anti-inflammatory properties were not obtained with peptidoglycanderived from the non-anti-inflammatory strain L. acidophilus NCFM, we conducted astructural analysis of the two peptidoglycans. While the two strains exhibited the M-tri-Lys-DAsnmuropeptide, we identified an additional muropeptide released exclusively by Ls33, theM-tri-Lys. Although both synthetic muropeptides activated NOD2 in vitro, only systemicadministration of M-tri-Lys protects mice from colitis. This protective effect was NOD2-dependent but did not require the presence of MyD88, the main adapter used by Toll-likereceptors.In conclusion, our results indicate that purified peptidoglycan and specific derivedmuropeptides are active components in probiotic lactobacilli functionality and represent anew therapeutic strategy for treating inflammatory bowel diseases.