• Langue : Français, Anglais
• Discipline : Biochimie et biologie moléculaire
• Identifiant : 2009LIL10099
• Type de thèse : Doctorat
• Date de soutenance : 17/12/2009

Résumé en langue originale

Ets-1 est un facteur de transcription qui régule des gènes impliqués dans divers processus physiologiques et pathologiques. Il n’agit pas seul au niveau de ses promoteurs cibles mais en coopération avec une variété de partenaires protéiques. L’identification de nouvelles protéines interagissant avec Ets-1 devrait nous permettre de mieux appréhender certaines de leurs fonctions intrinsèques. Dans ce but, nous avons mis au point une stratégie de purification par affinité des partenaires protéiques d’Ets-1. Ceci nous a permis d’identifier et de confirmer comme partenaires d’interaction d’Ets-1, les trois protéines du complexe DNA-PK : Ku70, Ku86 et DNA-PKcs. Nous avons ensuite déterminé les conséquences fonctionnelles des interactions. Ces résultats ont permis de définir une nouvelle régulation de son activité qui pourrait fournir de nouveaux indices pour comprendre les diverses fonctions d’Ets-1.Dans une autre étude, nous avons démontré que l’isoforme majoritaire Ets-1 p51 est un nouveau substrat de la caspase-3, protéase effectrice de la machinerie apoptotique. En effet, Ets-1 p51, mais pas le variant d’épissage Ets-1 p42, est clivé in vitro et dans des cellules apoptotiques par la caspase-3. Ce clivage génère trois fragments C-terminaux : Cp20, Cp17 et Cp14 et un fragment N-terminal Np36. le fragment Cp17, le principal produit de clivage, est capable de bloquer l’activation des promoteurs cibles induites par Ets-1 p51, démontrant ainsi ses propriétés de dominant négatif naturel. Ces données suggèrent un nouveau mécanisme de régulation d'Ets-1 via son clivage par la caspase-3 en générant un fragment dominant négatif qui peut jouer un rôle actif durant l'apoptose

Résumé traduit

Ets-1 is a transcription factor that regulates genes involved in various physiological and pathological processes. Ets-1 proteins do not act alone on their target promoters but with a wide range of protein partners. Identifying novel proteins that interact with Ets-1 should permit a better understanding of the intrinsic functions of the Ets-1 proteins. For this purpose, we develop an affinity purification strategy of Ets-1 interaction partners using streptavidin pull-down assay. We thereby identified new potentials interaction partners consisting for a heterotrimeric complex of DNA-PK, made up of Ku70, Ku86 and DNA-PKcs. Then, we characterized the functional consequences of the interactions. These results have permit to identify a new regulation of its activity that could provide new clues to understand the diverse functions of Ets-1.In another study, we demonstrated that the majority isoform Ets-1 p51 is a novel cleavage substrate of caspase-3, an effector protease of apoptosis. Indeed, Ets-1 p51, but not the spliced variant Ets-1 p42, is processed in vitro and in cells undergoing apoptosis by caspase-3. These cleavages lead to the generation of three C-terminal fragments Cp20, Cp17 and Cp14 and a N-terminal fragment, Np36. The Cp17 fragment, the major cleavage product generated during apoptosis, inhibits Ets-1 p51-mediated transactivation of target genes, acting thus as a natural dominant-negative of the full-length Ets-1 p51 protein. These data suggest a novel mechanism of Ets-1 p51 regulation through its caspase-mediated cleavages and generation of a dominant-negative fragment, which may play active role during apoptosis